…From Single Molecules to Cells…
Fachbereich 14

Ziel diese Praktikums ist es, in eigenständiger Arbeit therapeutisch wichtige menschliche Proteine rekombinant in E.coli zu exprimieren. Dazu werden den Praktikanten/Innen verschiedene Expressionsplasmide und -systeme zur Verfügung gestellt. Die Praktikanten/Innen transformieren diese Plasmide in E. coli Zellen, induzieren die Proteinexpression und reinigen anschliessend die rekombinanten Proteine durch Affinitätschromatographie. Je nach dem, welches menschliche Protein rekombinant exprimiert wurde, werden anschliessend funktionelle Enzymassays oder andere funktionelle Assays angewendet, um die Funktion des rekombinanten Proteins zu studieren. Sind keine enzymatischen Funktionen testbar, so werden Western-Blot-Analysen mit spezifischen Antiseren durchgeführt

Lernziele /
Kompetenzen:

Die Studierenden sollen in erster Linie eigenständig arbeiten lernen (Ansetzen aller benötigten Lösungen und Medien, eigenständige Versuchsplanung) und ihre bislang erworbenen Kenntnisse in die Praxis umsetzen. Lernziele sind:

• die rekombinante Expression und die Reinigung der menschlichen Proteine
• Ausbeutenbestimmung
• Verwendung der rekombinanten Proteine in funktionellen Assay (Funktionsbestimmung) oder
• Nachweis der Protein durch spezifische Antiköper im Western-Blot-Experiment
• eigenständige Beurteilung und Diskussion der Ergebnisse
• wissenschaftliches Arbeiten

Um den wissenschaftlichen Rahmen vorzugeben, werden den Studierenden aktuelle Publikationen zu den jeweiligen Proteinen oder Problemen ausgegeben. Sie werden in der Nachbesprechung zusammen mit den eigenen Daten diskutiert.